山梨酸、苯甲酸、 对羟基苯甲酸及其酯类、对氯苯甲酸和邻羟基苯酸（水杨酸）的测定

                果汁饮料－山梨酸、苯甲酸、 对羟基苯甲酸及其酯类、

                    对氯苯甲酸和邻羟基苯酸（水杨酸）的测定－直接滴定法

1 范围

本方法适用于果汁饮料中防腐剂的测定。 

2 原理

用乙醚抽取饮料中的防腐剂，用薄层层析分离，在紫外光下检验。

3 试剂 

3.1 无水硫酸钠；

3.2 碳酸氢钠；

3.3 20%硫酸；

3.4冰醋酸，分析纯

3.5 甲醇，分析纯；

3.6 96%乙醇；

3.7 乙醚，分析纯；

3.8 石油醚，40～60℃；

3.9 丙酮，分析纯；

3.10 苯，分析纯；

3.11 正戊烷，层析用（沸点范围34～36℃）；

3.12 正己烷，层析用（沸点68～69℃）；

3.13 聚酰胺粉：TLC11；

3.14 聚酰胺粉：TLC11，UV254；

3.15 荧光指示剂；

3.16 配制溶剂：溶剂A（用于各种酸的分离）：丙酮/苯/醋酸为40：5：1（体积比）； 溶剂B（用于特别小的可辨认外形的斑点）：苯/丙酮/醋酸为60：3：1（体积比）；溶剂C（用于对羟基苯酸的酯类的分离）：正戊烷/正己烷/醋酸为10：10：3（体积比）。沸点相同的石油醚可用来代替正戊烷或正己烷；

3.17 对比溶液的配制：0.1%乙醇溶液：山梨酸、对氯苯甲酸、邻羟基苯酸、对羟基苯酸及酯类均用乙醇配成0.1%的乙醇溶液；0.2%苯甲酸乙醇溶液。

4 仪器 

4.1 喷雾器； 

4.2 展开槽；

4.3 微量注射器

4.4 紫外灯；

4.5 吹风机；

4.6 薄板：20×20cm或20×5cm。

5 分析步骤 

（1）薄板的制备：聚酰胺粉12.0g和0.3g荧光指示剂在干燥条件下先混匀，然后在带搅拌的混合器，加60mL甲醇，充分混匀。将此混合物均匀涂布在薄板上，在室温下干燥。也可以直接用带荧光指示剂的聚酰胺粉制板。

（2）薄板层析：吸取50mL果汁或其它饮料，加10mL 20%硫酸，使样品成为高酸性。在分液漏斗中分别用20mL的石油醚与乙醚混合物（1：1）抽提三次。用少量蒸馏水洗涤收集的醚相，加无水硫酸钠干燥。在水浴上将大部分乙醚-石油醚蒸发掉。为了防止防腐剂的损失，剩下1～2mL乙醚-石油醚用小吹风机在室温条件下吹干，残渣用1mL乙醇溶解。用微量注射器吸取吸取3～5μL点在薄板上，用溶剂A展开至15cm高（在展开槽中浸润、展开大约需1～2h）。在测定对羟基苯酸的酯类时，抽提出的乙醚-石油醚在蒸发前应加碳酸氢钠，剧烈摇晃，除去酸类。展开剂用溶剂C。为了得出各种防腐剂的Rf值，可以分别使用对比溶液点样、展开。展开槽应密封良好，因为丙酮和戊烷的蒸发压力较高。展开好的薄板在室温下晾干一会，然后在紫外光（254nm）下观察。除了水杨酸（邻羟基苯酸）外，其他防腐剂都在黄绿色的荧光底板上显出黑色斑点。水杨酸则呈现明显的亮蓝色荧光点。

    （下略）