还原型抗坏血酸的测定

                        中国人民共和国国家标准

                          GB/T 5009.159-2003

                水果－还原型抗坏血酸的测定－分光光度法

1 范围

本标准规定了食品中抗坏血酸的分光光度法。

本标准适用于各类食品中还原型抗坏血酸的测定。

本标准不适用于脱氢型抗坏血酸的测定。

2 原理

在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物。在最大吸收波长420nm处测定吸光度，与标准系列比较定量。

3 试剂

3.1 乙酸溶液（2mol/L）：吸取11.6mL冰乙酸，加水稀释至100mL；

3.2 乙酸溶液（0.5mol/L）：吸取2.9mL冰乙酸，加水稀释至100mL；

3.3 乙二胺四乙酸二钠溶液（0.25mol/L）：称取9.3g乙二胺四乙酸二钠［C10H14N2O8Na2•2H2O］于水中，加热使之溶解后，放冷，并稀释至100mL；

3.4 蛋白沉淀剂；

3.4.1 乙酸锌溶液（220g/L）：称取22.0g乙酸锌［Zn(CH3COO)2•2H2O］，加3mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL；

3.4.2 亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾［K4Fe(CN)6•3H2O］，加水溶解至100mL；

3.5 显色剂：固蓝盐B（Fast Blue Salt B）溶液（2g/L）：准确称取0.2g固蓝盐B，加水溶解于100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度（该溶液在室温下贮存可稳定3d以上）；

3.6 抗坏血酸标准储备溶液（2.0g/L）：精密称取0.2000g抗坏血酸，加20mL乙酸溶液（2mol/L）溶解后移入100mL棕色容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。此溶液每毫升相当于2.0mg抗坏血酸（10℃下冰箱内贮存在2d内稳定）；

3.7 抗坏血酸标准储备溶液（0.1g/L）：用移液管精密吸取5.0mL抗坏血酸标准储备溶液（2.0g/L）于100mL棕色容量瓶内，加5mL乙酸溶液（2mol/L），用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于100μg抗坏血酸（临用时配制）。

4 仪器

4.1 分光光度计；

4.2 捣碎机；

4.3 离心沉淀机；

4.4 10mL具塞玻璃比色管。

5 分析步骤

5.1 试样溶液的制备

称取水果鲜样可食部分20.0g~50.0g于捣碎机内，加同倍量的乙酸溶液（2mol/L）捣成匀浆。称取10.0g~20.0g匀浆（含0.2g/kg以下抗坏血酸）于100mL棕色瓶内，加5mL乙酸溶液（2mol/L），用水稀释至刻度，混匀。滤纸过滤，滤液备用。不易过滤的试样可用离心机离心后，上清液供测定。

5.2 标准曲线的绘制

精密吸取0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0mL抗坏血酸标准使用溶液（相当于抗坏血酸0，10.0，20.0，40.0，60.0，80.0，100.0，150.0，200.0μg），分别置于10mL比色管中。各加0.3mL乙二胺四乙酸二钠溶液（0.25mol/L）、0.5mL乙酸溶液（0.5mol/L）、1.25mL固蓝盐B溶液（2g/L），加水稀释至刻度，混匀。室温（20℃~25℃）下放置20min后，移入1cm比色皿内，以零管为参比，于波长420nm处测量吸光度，以标准各点吸光度绘制标准曲线。

5.3 试样测定

非蛋白性试样的测定：精密吸取按5.1制备的试样溶液0.5mL~5.0mL（约相当于抗坏血酸200μg以下）于10mL比色管内。以下按5.2自“加0.3mL乙二胺四乙酸二钠溶液（0.25mol/L）……”起依法操作。试样吸光度从标准曲线上查出抗坏血酸含量。

    （下略）