大肠菌群的测定

                        中华人民共和国国家标

                            GB 4789.3-94

                  果品制品－大肠菌群的测定－计数法

1 范围

本方法规定了果品制品中大肠菌群的测定方法。

本方法适用于果品制品中大肠菌群的测定。

2 术语

大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

3 培养基和试剂

3.1 乳糖胆盐发酵管：成分为蛋白胨（20g）、猪胆盐（或牛、羊胆盐）（5g）、乳糖（10g）、0.04%溴甲酚紫水溶液（25mL）和蒸馏水1000mL，调pH7.4。将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，每管分装10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min；

3.2 伊红美蓝琼脂平板：成分为蛋白胨（10g）、乳糖（10g）、磷酸氢二钾（2g）、琼脂（17g）、2%伊红Y溶液（20mL）、0.65%美蓝溶液（10mL）蒸馏水1000mL，调pH为7.1。将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热熔化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板；

3.3 乳糖发酵管：成分为蛋白胨（10g）、乳糖（10g）、0.04%溴甲酚紫水溶液（25mL）和蒸馏水1000mL，调pH7.4。将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min；

3.4 EC肉汤：胰蛋白胨（20g）、3号胆盐（或混合胆盐）（1.5g）、乳糖（5g）、磷酸氢二钾（4g）、磷酸二氢钾（1.5g）、氢化钠（5g）及蒸馏水1000mL。将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，最终pH为6.9±0.2；

3.5 磷酸盐缓冲稀释液：用34g磷酸二氢钾溶解于500mL蒸馏水中，再用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH至7.2，再用蒸馏水稀释至1000mL，制成磷酸盐缓冲液的储存液。取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min；

3.6 生理盐水；

3.7 革兰氏染色液：

3.7.1 结晶紫染色液：将结晶紫1g溶于95%乙醇20mL中，再与1%草酸铵水溶液80mL混合。

3.7.2 革兰氏碘液：将碘1g、碘化钾2g先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。

3.7.3 沙黄复染液：沙黄0.25g溶解于95%乙醇10mL，再用90mL蒸馏水稀释。

4 设备和材料

4.1 温箱：36±1℃；

4.2 冰箱：0～4℃；

4.3 恒温水浴：44.5±0.5℃；

4.4 天平；

4.5 显微镜；

4.6 均质器或乳钵；

4.7 平皿：直径为90mm；

4.8 试管；

4.9 吸管；

4.10 广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL；

4.11 玻璃珠：直径约5mm；

4.12 载玻片；

4.13 酒精灯；

4.14 试管架。

    (下略)