金黄色葡萄球菌的测定

                         中华人民共和国国家标准

                            GB 4789.10-1994

               果品制品－金黄色葡萄球菌的测定－计数法

1 范围

本方法为果品制品中金黄色葡萄球菌的检验方法。

本方法适用于果品制品中毒样品中金黄色葡萄球菌的检验。

2 引用标准

GB 4789.28  食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

3 培养基和试剂

3.1 胰酪胨大豆肉汤：

3.1.1 成分：胰酪胨(或胰蛋白胨)17g、植物蛋白胨(或大豆蛋白胨)3g、氯化钠100g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄糖2.5g、蒸馏水1000mL；

3.1.2 制法：将上述成分混合，加热并轻轻搅拌并溶解，分装后，121℃高压灭菌15min，最终pH7.3 ±0.2； 

3.2 氯化钠(7.5%)肉汤：

3.2.1 成分：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠75g、蒸馏水1000mL、pH7.4；

3.2.2 制法：将上述成分加热溶解，校正pH，分装试管，121℃高压灭菌15min； 

3.3 血琼脂平板：

3.3.1 成分：pH7.4～7.6豆粉琼脂100mL，脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL； 

3.3.2 制法：加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂； 

3.4 琼脂平板(Baird－Prker)：

3.4.1 成分：胰蛋白胨10 g、牛肉膏5g、酵母膏1g、丙酮酸钠10g、甘氨酸12g、氯化锂(LiCl•6H2O) 5g、 琼脂20g，蒸馏水950mL pH 7.5；

3.4.2 增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内；

3.4.3 制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25℃，校正pH。每瓶分装95mL， 121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。 

3.5 肉浸液肉汤：

3.5.1 成分：绞碎牛肉500g、氯化钠5g、蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g、蒸馏水1000mL；

3.5.2 制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶， 121℃高压灭菌30min；

3.6 灭菌盐水

3.7 兔血浆：取3.8%柠檬酸钠溶液一份加兔(或人)全血四份，混好静置之，则血球下降，即可得血浆进行试验。

4 设备和材料　 

4.1 显微镜；

4.2 温箱：36±1℃；

4.3 离心机；

4.4 灭菌吸管：1mL、10mL；

4.5 灭菌试管；

4.6 灭菌平皿；

4.7 均质器；

4.8 载玻片；

4.9 涂布棒(L型)；

4.10 酒精灯；

4.11 接种环。

    (下略)