溶血性链球菌的测定

                          中华人民共和国国家标准

                            GB 4789.11-1994

                果品制品－溶血性链球菌的测定－计数法

1 范围

本方法为果品制品中溶血性链球菌的检验方法。

本方法适用于果品制品中毒样品中溶血性链球菌的检验。

2 引用标准

GB 4789.28－2003　食品卫生微生物学检验　染色法、培养基和试剂

3 培养基和试剂

3.1 肉浸液肉汤：

3.1.1 成分：绞碎牛肉500g、氯化钠5g、蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g、蒸馏水1000mL；

3.1.2 制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min； 

3.2 葡萄糖肉浸液肉汤：

肉浸液肉汤同3.1，另加入1%葡萄糖； 

3.3 匹克氏肉汤：

3.3.1 成分：含1%胰蛋白胨的牛心浸液200mL、1∶25000结晶紫盐水溶液10mL、1∶800三氮化钠溶液10mL、脱纤维兔血(或羊血) 10mL；

3.3.2 制法：将上述已灭菌的各种成分，用无菌手续依次混合，分装于无菌试管内，每管约2mL，保存于冰箱内备用； 

3.4 血琼脂平板：

3.4.1 成分：pH7.4～7.6豆粉琼脂 100mL、脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL；

3.4.2 制法：加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。

3.5 人血浆；

3.6 氯化钙(0.25%)；

3.7 灭菌生理盐水；

3.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。

4 设备和材料

4.1 冰箱：0℃~4℃；

4.2 恒温培养箱：36±1℃；

4.3 恒温水浴锅：36±1℃；

4.4 显微镜；

4.5 均质器或灭菌乳钵；

4.6 离心机：4000r/min；

4.7 架盘药物天平：0g～500g，精确至0.5g； 

4.8 灭菌试管：10mm×100mm、16mm×160mm；

4.9 灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）；

4.10 灭菌锥形瓶：100mL；

4.11 灭菌培养基：直径90mm；

4.12 灭菌棉签、镊子等。

    (下略)